中国水产科学研究院长江水产研究所李晓晖获国家专利权
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龙图腾网获悉中国水产科学研究院长江水产研究所申请的专利一种敲除异源八倍体长丰鲫runx2b基因的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120966918B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511085367.2，技术领域涉及：C12N15/89；该发明授权一种敲除异源八倍体长丰鲫runx2b基因的方法及应用是由李晓晖;梁宏伟;耿子阳设计研发完成，并于2025-08-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种敲除异源八倍体长丰鲫runx2b基因的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种敲除异源八倍体长丰鲫runx2b基因的方法及应用。本发明针对长丰鲫中异育银鲫和兴国红鲤两套亲本来源的runx2b全部等位基因，设计了gRNA‑1和gRNA‑2；将体外转录合成的两个gRNA与Cas9蛋白混合，采用显微注射的方式将混合物导入长丰鲫受精卵单细胞期的动物极中，能够高效敲除runx2b‑A和runx2b‑B全部8个等位基因。其中任一gRNA均可引导CRISPRCas9系统同时编辑8个等位基因；gRNA‑1实现97.5%的同步敲除率，gRNA‑2达成95%的同步敲除效率；当采用双gRNA协同切割策略时，8个功能拷贝的完全编辑效率达到100%。
本发明授权一种敲除异源八倍体长丰鲫runx2b基因的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种敲除异源八倍体长丰鲫runx2b基因的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、针对长丰鲫中两套亲本来源的runx2b等位基因设计gRNA-1和gRNA-2；所述gRNA-1或gRNA-2均同时特异性靶向runx2b的8个等位基因；其中，gRNA-1靶位点序列如SEQIDNO:1所示，gRNA-2靶位点序列如SEQIDNO:2所示； S2、以保守的下游Scaffoldoverlap引物与带有T7启动子的特异性包含gRNA-1靶位点序列或gRNA-2靶位点序列的上游引物，进行overlapPCR扩增并纯化；以上述纯化后的PCR产物为模板，体外转录并纯化分别获得gRNA-1和gRNA-2；将gRNA-1、gRNA-2和Cas9蛋白混合，显微注射到长丰鲫单细胞期的受精卵中。
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