福建医科大学附属第一医院刘周杰获国家专利权
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龙图腾网获悉福建医科大学附属第一医院申请的专利一种可用于摇摆型碱基对等位基因分型精准测定的比率型DNA电化学传感器获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116559257B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310504271.X,技术领域涉及:G01N27/327;该发明授权一种可用于摇摆型碱基对等位基因分型精准测定的比率型DNA电化学传感器是由刘周杰;陈锦元;许艳芳;黄晨;梁钰琪;杨良永;蓝瑞隆设计研发完成,并于2023-05-07向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种可用于摇摆型碱基对等位基因分型精准测定的比率型DNA电化学传感器在说明书摘要公布了:本发明公开一种可用于摇摆型碱基对等位基因分型的比率型DNA电化学传感器,特点是创新性地利用非特异性扩增策略连接酶链式反应,LCR,以及与摇摆型碱基对GT、AC相比,沃克森碱基对GC、AT具有更高扩增效率且在LCR中占主导作用的特性。以等位基因为目标基因,基于沃克森碱基对互补原则,设计了两个LCRLCRFc→G和LCRMB→A,选用在临床样品中具备稳定检测性能的电活性指示剂二茂铁Fc和亚甲基蓝MB作为两个LCR的电化学响应信号,并将其电流比值IMBIFc作为等位基因分型的输出信号,最后,依据IMBIFc区域划分可实现摇摆型碱基对等位基因分型纯合野生型、纯合突变型、杂合型的精准测定。
本发明授权一种可用于摇摆型碱基对等位基因分型精准测定的比率型DNA电化学传感器在权利要求书中公布了:1.一种可用于CYP2C19*2等位基因精准分型的检测方法,其特征在于包括如下步骤:采用比率型DNA电化学传感器进行检测;1利用连接酶链式反应LCR,构建比率型DNA电化学传感器R-eLCR;2选用电活性指示剂二茂铁Fc和亚甲基蓝MB作为LCR的电化学响应信号,实验验证Fc和MB在R-eLCR中具备相似的电信号响应;3以CYP2C19*2为检测目标,设计两个LCR,即LCRFc→G和LCRMB→A,依据其电流比值IMBIFc区域划分三个电流比值区间,即IMBIFc<1,1<IMBIFc<2,IMBIFc>2,在人全血基因组DNA检测中,能特异性区分CYP2C19*2等位基因的三种基因型,即CYP2C19*1*1、CYP2C19*2*2、CYP2C19*1*2;在设计两个LCRLCRFc→G和LCRMB→A探针时:对于探针LCRMB→A,其设计的四条引物探针中,探针HT1和探针HT2A分别为CYP2C19*2等位基因特异性基因片段A-containedtarget的一半,而辅助探针AP和MB修饰的信号探针SPMB分别与探针HT1和探针HT2A互补,四条引物探针的具体序列和修饰基团如表1所示;对于探针LCRFc→G,其设计的四条引物探针中,探针HT1和探针HT2G分别为CYP2C19*1等位基因特异性基因片段G-containedtarget的一半,而辅助探针AP和Fc修饰的信号探针SPFc分别与探针HT1和探针HT2G互补,四条引物探针的具体序列和修饰基团如表1所示;其中,探针HT1和探针AP为两个LCR的共同探针,所述辅助探针AP的5’端有一段12nt序列与CP的3’端互补,CP的5’端修饰-SH基团,使得两个LCR的信号探针SP与AP连接后电活性指示剂MBFc以倒立形式靠近电极表面,发生电子转移,产生相应的电化学信号; 表1R-eLCR的引物探针序列 。
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