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龙图腾网获悉南通凯恒生物科技发展有限公司申请的专利基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116334258B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310200049.0，技术领域涉及：C12Q1/689；该发明授权基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法是由李新章;蔡蓉凤;周楠迪设计研发完成，并于2023-03-06向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法在说明书摘要公布了：本发明涉及基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法，通过核酸外切酶I和核酸外切酶III的双酶识别反应体系对有无金黄色葡萄球菌的样品进行识别和区分。含有金黄色葡萄球菌的样品在双酶识别反应体系中产生有效燃料链，引发DNA步行器沿着运动轨道发生位移，进一步触发荧光共振能量转移，最终获得与目标浓度相关的放大荧光信号；根据荧光强度与金黄色葡萄球菌浓度之间的关系测定污染样品中金黄色葡萄球菌的浓度。本发明提高了DNA步行器的可控性和运动效率，降低脱轨和中断的风险。在9‑90CFU·mL‑1的检测范围内定量检测的准确率达到100％，检测的重现性和回收率达到98％以上，可以检测到含2CFU·mL‑1的金黄色葡萄葡萄糖球菌的样品。

本发明授权基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法在权利要求书中公布了：1.基于导航型DNA步行器和荧光调控机制的金黄色葡萄球菌荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 通过构建核酸外切酶I和核酸外切酶III的双酶识别反应体系对含不含金黄色葡萄球菌的样品进行区分，所述核酸外切酶I和核酸外切酶III的双酶识别反应体系包括适配体识别体系、核酸外切酶I反应体系、核酸外切酶III反应体系； 金黄色葡萄球菌适配体和cDNA1部分互补构成适配体识别体系，金黄色葡萄球菌适配体与金黄色葡萄球菌结合后释放cDNA1，游离的cDNA1单链被核酸外切酶I水解；在核酸外切酶III反应体系中，Hp与cDNA2部分互补，水解产物加入该体系后，在酶切作用下产生水解产物作为有效燃料链； 导航型DNA步行器的运动轨道有四条支撑DNA以及两条含猝灭基团的短链自组装形成，样品中的金黄色葡萄球菌经过核酸外切酶I和核酸外切酶III的双酶识别反应体系的识别和反应后产生有效燃料链，触发导航型DNA步行器沿着骨架轨道发生位移，产生与目标浓度相关的放大荧光信号，目标浓度是指样品中的金黄色葡萄球菌的浓度； 不含金黄色葡萄球菌的空白样仅收集到荧光背景信号； 具体步骤如下： 步骤S1、构建核酸外切酶I和核酸外切酶III的双酶识别反应体系 适配体识别体系：将金黄色葡萄球菌适配体和cDNA1序列加入PBS缓冲液中混匀，加热进行热变性得到第一混合物，然后对第一混合物进行孵育以制备适配体cDNA1双链；含有金黄色葡萄球菌的溶液经过离心，使用PBS缓冲液清洗沉淀后重悬于PBS缓冲液中，得到含有金黄色葡萄球菌的PBS缓冲液； 核酸外切酶I反应体系：将含有金黄色葡萄球菌的PBS缓冲液与适配体cDNA1双链混合，随后加入10×核酸外切酶I反应缓冲液、双蒸水和核酸外切酶I进行孵育，反应结束后得到第二混合物，对第二混合物离心，取上清液孵育使核酸外切酶I灭活，冷却至室温得到核酸外切酶I反应体系物； 核酸外切酶III反应体系：将核酸外切酶I反应体系物加入Hp和cDNA2、核酸外切酶III、10×核酸外切酶III反应缓冲液和双蒸水进行孵育，反应结束后灭活，得到核酸外切酶III反应体系物； 步骤S2、DNA骨架轨道制备 分别将S1、S2、S3、S4、导航型DNA步行器、Q1和Q2加入PBS缓冲液中，加热进行热变性，冷却后在不同温度梯度下进行孵育，得到DNA骨架轨道溶液； 步骤S3、荧光信号检测和标准曲线制备 取得到核酸外切酶III反应体系物与DNA骨架轨道溶液混合，孵育，使用多功能酶标仪读取激发波长488nm、发射波长605nm处的ROX荧光强度；使用PBS缓冲液将金黄色葡萄球菌连续稀释10倍来制备不同浓度的金黄色葡萄球菌样品，根据金黄色葡萄球菌浓度的对数值与ROX荧光强度的关系，绘制相应的线性曲线，计算线性回归方程和检出限； 步骤S4、实际样品检测 将含有金黄色葡萄球菌的水样按照步骤S1~S3操作，测定相应的荧光信号，并按照线性回归方程计算水样中的金黄色葡萄球菌的浓度； 所述方法是非疾病诊断目的。

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