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龙图腾网获悉清华大学申请的专利通过人类多能干细胞分化制备巨噬细胞的试剂及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115851580B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210808475.8，技术领域涉及：C12N5/0735；该发明授权通过人类多能干细胞分化制备巨噬细胞的试剂及其应用是由那洁;王佩亮;陈霞;张雅瑄设计研发完成，并于2022-07-11向国家知识产权局提交的专利申请。

本通过人类多能干细胞分化制备巨噬细胞的试剂及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了通过人类多能干细胞分化制备巨噬细胞的试剂及其应用。具体地公开了制备巨噬细胞的试剂和方法，所述试剂包括培养液和3D微支架材料，所述培养液由培养液Ⅱ、培养液Ⅲ、培养液Ⅳ、培养液Ⅴ和培养液VI组成。本发明利用3D微支架，研发了化学成分确定、不含动物源成分、成本低廉，有利于作为临床级别的干细胞分化培养体系，能够使人多能干细胞快速持续高效的分化出大量高纯度的巨噬细胞。本发明的试剂和方法具有耗时短、分化效率高、成本较低、更有利于大规模自动化产业化生产等特点。采用本发明提供的制备方法可大规模生产人巨噬细胞，质量稳定，安全性高，为组织工程、药物研发和细胞治疗提供大量细胞来源。

本发明授权通过人类多能干细胞分化制备巨噬细胞的试剂及其应用在权利要求书中公布了：1.一种制备巨噬细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： H1将人多能干细胞接种于培养液Ⅰ中培养0.5-1.5天； H2更换为培养液Ⅱ继续培养0.5-1.5天； H3更换为培养液Ⅲ继续培养1.5-2.5天； H4消化收集步骤H3的细胞，将所述细胞接种于3D微支架材料制备的3D微支架中，采用培养液Ⅳ培养2.5-3.5天； H5更换为培养液Ⅴ继续培养2.5-3.5天； H6更换为培养液VI培养20-80天，收集得到所述巨噬细胞； 所述培养液Ⅰ为含有ROCK抑制剂的干细胞培养液； 所述培养液Ⅱ为含有体积分数为2%的无胰岛素的B27添加剂、1mML-谷氨酰胺替代物、体积分数为1%的非必需氨基酸、100Uml青霉素、100μgml链霉素、50ngml维生素C和5ngml人骨形成蛋白4的RPMI1640培养液，其中所述非必需氨基酸由甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-脯氨酸和L-丝氨酸组成，甘氨酸在培养液Ⅱ中的浓度为750.0ngmL；L-丙氨酸在培养液Ⅱ中的浓度为890ngmL；L-天冬酰胺在培养液Ⅱ中的浓度为1320ngmL；L-天冬氨酸在培养液Ⅱ中的浓度为1330ngmL；L-谷氨酸在培养液Ⅱ中的浓度为1470ngmL；L-脯氨酸在培养液Ⅱ中的浓度为1150ngmL；L-丝氨酸在培养液Ⅱ中的浓度为1050ngmL； 所述培养液Ⅲ为含有GSK3抑制剂的培养液，所述培养液是以所述培养液Ⅱ为溶剂，以GSK3抑制剂为溶质配制而成的液体；所述GSK3抑制剂为CHIR-99021；所述CHIR-99021在培养液Ⅲ中的含量为2μM； 所述培养液Ⅳ为含有体积分数为2%的添加了胰岛素的B27添加剂、1mML-谷氨酰胺替代物、体积分数为1%的非必需氨基酸、100Uml青霉素、100μgml链霉素、50ngml维生素C、50ngml人血管内皮生成因子VEGF-165和10ngml人成纤维生长因子的RPMI1640培养液，其中所述非必需氨基酸由甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-脯氨酸和L-丝氨酸组成，甘氨酸在培养液Ⅳ中的浓度为750.0ngmL；L-丙氨酸在培养液Ⅳ中的浓度为890ngmL；L-天冬酰胺在培养液Ⅳ中的浓度为1320ngmL；L-天冬氨酸在培养液Ⅳ中的浓度为1330ngmL；L-谷氨酸在培养液Ⅳ中的浓度为1470ngmL；L-脯氨酸在培养液Ⅳ中的浓度为1150ngmL；L-丝氨酸在培养液Ⅳ中的浓度为1050ngmL； 所述培养液Ⅴ为含有人巨噬细胞集落刺激因子的培养液，所述培养液是以所述培养液Ⅳ为溶剂，以人巨噬细胞集落刺激因子为溶质配制而成的液体；所述人巨噬细胞集落刺激因子在培养液Ⅴ中的含量为50ngml； 所述培养液VI为含有体积分数为2%的添加了胰岛素的B27添加剂、1mML-谷氨酰胺替代物、体积分数为1%的非必须氨基酸、100Uml青霉素、100ugml链霉素、50ngml维生素C、10ngml人白细胞介素-3和50ngml人巨噬细胞集落刺激因子的RPMI1640培养液，其中非必需氨基酸由甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-脯氨酸和L-丝氨酸组成，甘氨酸在培养液VI中的浓度为750.0ngmL；L-丙氨酸在培养液VI中的浓度为890ngmL；L-天冬酰胺在培养液VI中的浓度为1320ngmL；L-天冬氨酸在培养液VI中的浓度为1330ngmL；L-谷氨酸在培养液VI中的浓度为1470ngmL；L-脯氨酸在培养液VI中的浓度为1150ngmL；L-丝氨酸在培养液VI中的浓度为1050ngmL； 所述3D微支架材料为由明胶溶液和生物冷冻保护剂混合液制备的多孔材料；所述多孔材料的孔径大小为50-100微米，所述混合液中明胶溶液为质量体积比为4%的明胶去离子水溶液，所述生物冷冻保护剂为DMSO，其体积分数为3%。

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