菁良基因科技(深圳)有限公司李菁华获国家专利权
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龙图腾网获悉菁良基因科技(深圳)有限公司申请的专利一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN114875181B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210751740.3,技术领域涉及:C12Q1/70;该发明授权一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法是由李菁华;程英;侯晓梅;刘楚新;刘清波;林欣欣;请求不公布姓名;请求不公布姓名;请求不公布姓名设计研发完成,并于2022-06-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法,属于生物制品技术领域。合成高危型HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82,低危型HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44、HPV81、HPV8325种分型HPV全基因组后,连入pcDNA3.1+骨架载体系统,将HPV全基因组分别整合到人卵巢癌细胞系ovcar3基因组中,获得25株稳定整合HPV全基因组的人卵巢癌细胞系。可制备基因组DNA、细胞沉淀、细胞悬液等各类模拟临床样品的新型质控品或试剂盒,适用于多种检测平台。为25种HPV分型全长基因组稳定整合的人源细胞系质控品,能更准确的测定病毒载量,质控HPV检测全流程。
本发明授权一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法在权利要求书中公布了:1.一种人乳头瘤病毒分子检测质控品的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 1合成HPV基因组序列,在所述HPV基因组序列的两端添加酶切位点,其中5’端的酶切位点为NheI,3’端的酶切位点为PmeI; 2通过酶切位点NheI、PmeI将所述HPV基因组序列连入pcDNA3.1+骨架载体,获得HPV分型质粒,将上述HPV分型质粒转染人卵巢癌细胞系ovcar3,转染体系配置如下: jetPRIME®buffer:75µL, HPV分型质粒:1µg, jetPRIME®reagent:3.6µL, 将上述配置体系混匀,置于室温下静置10min,混匀后的体系加入提前接种ovcar3细胞系的12孔板中,培养箱中孵育4h-6h后更换正常培养基; 3转染后24h,将细胞培养基换成包含抗生素的G418培养基,进行细胞的筛选;筛选结束后,将剩余的细胞进行单细胞克隆,待单细胞克隆形成时,标记有克隆的孔,加入胰蛋白酶消化细胞,将消化后的细胞分为两部分,一部分细胞作为扩增模板,使用引物对单克隆进行扩增及sanger测序验证HPV全基因组是否整合成功;另一部分细胞扩大培养,备用; 4选取sanger测序验证HPV全基因组成功整合的单细胞克隆,将克隆扩大培养,提取gDNA,采用数字PCR检测挑选的克隆中HPV的拷贝数;并以ddPCR鉴定拷贝数为参考,制备不同拷贝数的梯度质控品;其中所述质控品为细胞悬液、细胞沉淀或gDNA形式。
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