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龙图腾网获悉复旦大学申请的专利一种高通量自动化血浆小RNA文库构建方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114807301B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111000539.3，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种高通量自动化血浆小RNA文库构建方法及其应用是由郑媛婷;幺欣彤;孙善月;杨竞成;任路瑶;王海燕;侯湾湾;郁颖;石乐明设计研发完成，并于2021-08-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种高通量自动化血浆小RNA文库构建方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明提供了一种高通量自动化血浆小RNA文库构建方法及其应用，具体地涉及高通量自动化血浆小RNA文库的构建，所述高通量自动化血浆小RNA文库构建方法可用作血浆小RNA表达水平定量研究、挖掘与疾病相关的潜在生物标志物。应用本发明的优化方法，可以在一天之内对96个起始量小于5ng的微量小RNA样本完成文库构建，通过高通量测序后，可以获得质量良好的数据。经性能评估分析，本发明的技术具有良好的跨批次稳定性，对于不同生物样本小RNA表达水平的内在生物学差异具有良好的区分能力，可用于超大型队列的小RNA文库构建实验。

本发明授权一种高通量自动化血浆小RNA文库构建方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种高通量自动化小RNA文库构建方法，使用NEXTFLEX®smallRNA-seq试剂盒进行建库，并且所述方法使用的仪器为Sciclone®NGSx自动化液体工作站，其特征在于，包括步骤： 1提供分离的小RNA样本； 2对所述的小RNA样本中的小RNA进行3’接头连接，从而获得3’带有接头样本； 3对3’带有接头的样本进行去除多余的3’接头； 4对去除多余的3’接头进行去活化处理； 5对步骤4获得的样本进行5’接头连接，从而获得带有5’接头的样本； 6对步骤5获得的样本进行反转录，从而获得两端带有接头的cDNA样本； 7对步骤6所获得的样本进行纯化处理； 8对步骤7获得的纯化样本进行文库扩增，从而获得扩增产物； 9对所述扩增产物进行纯化处理及建库，从而获得小RNA文库； 其中，多余的3’接头移除ExcessAdapterRemoval包含以下步骤： 3-1在步骤2产物中添加步骤2终产物体积比1.05-1.5倍的接头去除试剂AdapterDepletionSolution及2倍的磁珠进行混合； 3-2添加步骤2终产物体积比3倍的异丙醇至步骤3-1的产物中，混合后反应5分钟； 3-35分钟后将样本板置于磁力架，静置5分钟待溶液澄清后去除上清液； 3-4将样本板放回工作平台，添加140-180uL的80%乙醇，反应30秒后去除乙醇； 3-5重复步骤3-4后静置2-3分钟，使乙醇完全挥发； 3-6添加步骤2终产物体积比1-1.2倍的缓冲液ResuspensionBuffer至步骤3-5的产物中，吹打混匀使得磁珠重悬，室温孵育2分钟； 3-7将样本板置于磁力架上，反应3分钟，使磁珠吸附到管壁磁环位置； 3-8待溶液澄清后，收集步骤3-7的产物中相对步骤2终产物体积比1倍的上清液，转移至一个新的样本板中； 3-9重复步骤3-1至3-7，其中步骤3-6的缓冲液换为步骤2终产物体积比0.5-0.7倍的无核酸水； 3-10待溶液澄清后，收集上清液至一个新的样本板中； 其中，在步骤2进行3’接头连接步骤中所使用的3’4N腺苷酸化随机性接头试剂3'4NAdenylatedAdapter需先稀释3-5倍后使用，和或在进行步骤5连接5’接头步骤中所使用的5’4N随机性接头试剂5’4NAdapter需先稀释3-5倍后使用。

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